BASIC AND TRANSLATIONAL INVESTIGATIONS

Autologous tumor lysate-loaded dendritic cell vaccination (DCVax-L) in glioblastoma: Breakthrough or fata morgana?

Matthias Preusser , Martin J van den Bent…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):631-634. doi: 10.1093/neuonc/noac281.

编译：段厚州 万大海 （山西医科大学第一附属医院）

GBM是成人最常见的原发性恶性脑肿瘤，预后差。目前，各种治疗方式的前瞻性随机临床试验未能显示出临床疗效。Liau等人报道了关于DCVAX-L Ⅲ期临床试验的结果，但存在诸多问题需要进一步探讨。

该研究最初是一项前瞻性多中心随机对照试验，2018年的初步报告指出应用DCVAX-L可延长GBM患者的OS。2022年第二篇报告公布了结果，因为假性进展干扰PFS的评估，主要终点更改为OS。最终他们引入了公开RCT中的外部对照人群(ECP)对数据进行了分析，最终得出DCVAX-L可延长新诊断和复发GBM患者的OS。但是，该结果无法促使DCVAX-L的临床应用。

外部对照要求数据集从诊断的方式、试验设计、纳入标准、终点和参与的中心几乎完全相似才有效。DCVAX-L试验有其特殊的纳入标准：(1)仅限于一侧大脑半球占位；(2)手术全切或次全切，排除活检患者；(3)获取抗原提呈细胞所需的白细胞在术后3周进行，类固醇在术前10天停用；(4)排除放疗后疾病进展的患者。然而本研究中纳入外部对照人群并未完全满足其特殊的标准，关键的预后因素如年龄、类固醇的使用、KPS评分和手术切除范围等并未完全匹配。

Ⅲ期临床试验的金标准终点仍是OS，本研究设计中涉及进展交叉，所以起初并未采用OS作为主要终点。所以对于进展交叉的使用是试验设计中需认真考虑的问题。

总之，严谨的前瞻性RCT仍是评估新疗法疗效的金标准。控制混杂因素对结果至关重要。本研究的数据分析有缺陷，不足以支撑结论，需要规范的RCT才能验证DCVAX-L真正的疗效。

Homeobox A3 and KDM6A cooperate in transcriptional control of aerobic glycolysis and glioblastoma progression

Rui Yang , Guanghui Zhang , Zhen Dong…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):635-647. doi: 10.1093/neuonc/noac231.

编译：牟岳阳（空军军医大学唐都医院）

糖酵解代谢转录调节因子的改变与脑肿瘤生长有关，但其潜在的分子机制尚不清楚。该研究报道了在胶质母细胞瘤(GBM)患者中异常高表达的转录因子同源盒A3 (HOXA3)，通过转录激活有氧糖酵解，导致细胞增殖和肿瘤生长显著加速的调控机制。

首先，通过肿瘤芯片数据库和肿瘤组织芯片的免疫组化结果表明，HOXA3在胶质瘤尤其是GBM中高表达，且HOXA3低表达的GBM患者较HOXA3高表达的患者生存时间更长。通过体外增殖和细胞周期实验和体内动物实验证明了HOXA3在GBM细胞增殖和肿瘤生长中发挥重要作用。

研究表明，HOX家族蛋白是肿瘤细胞有氧糖酵解的关键调节因子。作者探究了HOXA3在GBM细胞中是否具有类似的功能作用。通过代谢物测量，发现HOXA3缺乏导致葡萄糖消耗和乳酸产生显著受到抑制，但葡萄糖摄取未受到抑制。由于GBM细胞优先使用有氧糖酵解来产生能量，随后作者通过Seahorse细胞能量代谢实验证明了HOXA3沉默的细胞中存在明显的糖酵解抑制，并且HOXA3缺失显著降低了ATP合成酶抑制剂寡霉素诱导的ATP抑制率和细胞增殖。同时，ORC实验证明，HOXA3的敲低增强了GBM细胞的线粒体呼吸。这些结果表明，HOXA3驱动GBM细胞的葡萄糖代谢从氧化磷酸化转向有氧糖酵解。

随后，作者检测了HOXA3沉默或恢复后关键糖酵解相关基因的表达，结果显示HOXA3缺失显著降低了多个糖酵解相关基因中HK2和PKM2的表达。由于HOXA3是一种转录因子，作者检测了HOXA3是否激活HK2和PKM2的转录并确定了HOXA3在HK2和PKM2上的潜在结合位点。通过ChIP和定量PCR实验结合荧光素酶报告基因实验，证明了HOXA3沉默显著抑制了HK2和PKM2启动子的活性。HOXA3作为转录因子的功能取决于它与DNA结合的Hbox结构域。在HOXA3结构域Hbox缺失的GBM细胞中，HK2和PKM2的表达没有变化，且没有促进糖酵解或增加乳酸的产生。这表明，HOXA3是通过激活HK2和PKM2的转录来促进有氧糖酵解的。

接下来探究了HOXA3转录激活有氧糖酵解的潜在机制。通过对TCGA GBM患者数据分析发现HOXA3的高表达导致大量甲基化基因的高表达。ChIP-qPCR显示，HOXA3沉默显著增加了HK2和PKM2启动子处的H3K27me3水平。组蛋白修饰H3K27me3是一种转录抑制因子，受组蛋白甲基转移酶和去甲基化酶调控，包括EZH2、KDM6A和KDM6B。在HOXA3沉默细胞中KDM6A明显减少，进一步的ChIP-qPCR证明了HOXA3激活了KDM6A的转录，并在HK2和PKM2启动子处降低了H3K27me3。随后重组了KDM6A在HOXA3沉默细胞中的表达，并检测了HK2和PKM2的表达，表明HOXA3对于KDM6A修饰HK2和PKM2启动子上的H3K27me3是必不可少的。进一步通过STRING数据集分析、双链-聚乳酸实验以及Co-IP实验表明，HOXA3与KDM6A相互作用，增强糖酵解基因HK2和PKM2的转录和表达。

最后，通过TCGA数据中分子表达和相关性分析发现上述分子之间表达均呈正相关，推测HOXA3可能需要KDM6A来转录调节需氧糖酵解，通过敲低KDM6A对糖酵解能力的检测发现KDM6A沉默可明显降低HOXA3促进GBM细胞有氧糖酵解的能力。动物研究表明，KDM6A敲低显著抑制了HOXA3促进脑肿瘤生长的作用，延长了小鼠的生存期。这些结果均表明，HOXA3需要KDM6A来激活有氧糖酵解和脑肿瘤生长。

总之，该研究证明了一种新的分子机制，即HOXA3介导的转激活和KDM6A偶联的H3K27去甲基化共同调节葡萄糖代谢和GBM进展。

Targeting integrin α2 as potential strategy for radiochemosensitization of glioblastoma

Irina Korovina , Anne Vehlow , Achim Temme, Nils Cordes…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):648-661. doi: 10.1093/neuonc/noac237.

编译：牟岳阳（空军军医大学唐都医院）

Targeting integrin α2 as potential strategy for radiochemosensitization of glioblastoma. Korovina I, Vehlow A, Temme A, Cordes N. Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):648-661. doi: 10.1093/neuonc/noac237. PMID: 36219689; PMCID: PMC10076950.

为了寻找局灶黏附的新的潜在癌症靶点，作者团队设计了一个靶向53个编码各种局灶黏附蛋白以及生长因子和细胞因子受体基因的siRNA文库，进行克隆生存试验测试了放疗(化疗)致敏性。结果表明整合素α2靶向显著损害了胶质瘤细胞U343MG的存活，并增强了对TMZ和辐照(IR)的敏感性。这表明整合素α2是治疗GBM的极有希望的候选者。

使用GEPIA网络工具比较分析显示ITGA2（编码整合素α2的基因）mRNA在GBM中显著高表达，并与肿瘤复发相关。根据Ivy GAP数据集分析显示ITGA2的高表达导致GBM患者的总体生存率显著降低。通过构建干细胞样表达整合素α2的GBM细胞模型并评估了整合素α2的其他关键肿瘤相关功能，包括增殖、侵袭、粘附和DNA损伤修复。结果表明GBM细胞中整合素α2的缺失会损害细胞的增殖、粘附和侵袭，而DSB的修复却不会改变。

接下来采用了具有侵袭性、过度血管化和明显核心坏死特征的原位GBM异种移植模型。将整合素α2缺失或对照的表达EGFP和荧光素酶的GS-8 GBM细胞植入小鼠左脑半球2周后，荷瘤动物接受3个周期的放化疗(4 Gy X射线/TMZ)。发光成像显示整合素α2缺陷肿瘤的生长明显延迟。表明整合素α2在肿瘤生长在当前标准放疗/TMZ治疗的反应中发挥了关键作用。

随后作者使用Pamgene®技术测定了磷酸酪氨酸(PTK)和丝氨酸/苏氨酸(STK)激酶的活性谱。在6gy X射线/TMZ给药下，整合素α2缺失的GBM细胞中，有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路优先受到影响。对MAPK信号通路关键组分 (如ERK1/2、p38)以及Akt的磷酸化进行评估，在6 Gy X射线/TMZ后6小时，整合素α2沉默后Ser473-Akt的磷酸化水平只有适度降低，而总Akt、ERK1/2 (Thr202/Tyr204)和p38 (Thr180/Tyr182)的磷酸化形式没有显著变化。随后分析了一些常见的下游靶点发现整合素α2缺陷的U343MG细胞中4E-BP1 (Ser65)磷酸化显著降低。此外，转录因子ATF1水平及其活性显著降低，并在24小时的观察期内保持稳定。同时观察到整合素α2和ATF1缺失时ERK1表达相似，而ERK2水平保持不变。这些数据表明，ATF1和信号介质ERK1在整合素α2介导的GBM细胞放化疗反应中起关键作用。

最后，作者在GBM细胞中进行了单、双、三重缺失整合素α2、ATF1、ERK1和ERK2，并分析了集落的形成和增殖，并通过组合敲低和克隆存活的测量来确定ATF1在功能上位于整合素α2的下游，ERK1和ERK2的上游。同时，荧光素酶报告基因实验分析表明整合素α2调控ATF1启动子活性是通过从-344到-20 bp的区域作用的。此外作者还证明了整合素α2缺乏抑制肿瘤生长，从而延长了原位生长的GBM异种移植物小鼠的存活时间。

综上所述，该研究表明整合素α2可能是克服GBM放射和化疗耐药的一个有希望的靶点。因此，评估整合素α2抑制剂辅助GBM标准放化疗的有效性和安全性是值得的。

Integrated longitudinal analysis of adult grade 4 diffuse gliomas with long-term relapse interval revealed upregulation of TGF-β signaling in recurrent tumors

Elham Kashani , Désirée Schnidrig , Ali Hashemi Gheinani…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):662-673. doi: 10.1093/neuonc/noac220.

编译：牟岳阳（空军军医大学唐都医院）

成人型弥漫性胶质瘤，CNS WHO 4级是最具侵袭性的原发性脑肿瘤，长期标准的放化疗后会出现耐药。为了探索治疗耐药驱动的原因，瑞士伯尔尼伯尔尼大学病理学研究所的研究者们使用来自43名astro-IDH-mut-G4/GBM患者成对首次治疗和治疗后组织的单中心集合进行了一项研究。

首先，纳入研究的有97名患者，这些患者的组织可在诊断（初始）和标准治疗后复发时进行切除。其中54名患者的切除时间间隔不到一年，因而选择其余43名患者，这些患者手术时间间隔为370-1890天（中位数689天）。39名患者为IDH野生型，4名患者有IDH突变型。分析结果表明肿瘤切除程度和复发间隔之间没有相关性（P=0.4572）。

全外显子测序分析(whole exome sequencing，WES) 使用成对的初始、复发性astro-IDH-mut-G4/GBM和28名有长期复发间隔的患者的正常组织或外周血进行。所有患者均接受TMZ治疗并同时接受RT治疗。初始肿瘤的突变范围为0.7-46.0(中位数为1.6)/Mb，复发肿瘤的突变范围为1.1-66.8(中位数为2.4)/Mb。尽管在7/28的患者中检测到MMR基因的治疗后突变，但它们与SBS15(缺陷MMR)无关。相反，MMR基因的突变主要出现在具有高SBS1信号的肿瘤中，这表明高突变负担很可能是由TMZ的超突变活性引起的，而不是由MMR基因的缺陷引起的。

分析还显示在7号染色体拷贝数增加,10号染色体拷贝数的损失,这是GBM IDH野生型的特征。在初始肿瘤中发生astro-IDH-mut-G4/GBM的已知驱动因素包括IDH1(2/2)、PTEN(5/7)、PIK3CA(4/6)、PIK3R1(3/3)和TP53(5/5)突变，这些突变在复发肿瘤中经常保留。相比之下，EGFR(9/ 11)、NF1(7/10)、RB1(3/4)的突变以及EGFR(4/8)、PDGFRA(3/3)和MDM2(2/3)的扩增都是初始或复发肿瘤所特有的。LTBP4只存在于复发肿瘤中，在14%的astro-IDHmut-G4/GBM中存在。

为了确定复发期长的WHO 4级胶质瘤的早期和晚期遗传事件，作者团队分析了整个队列的肿瘤发展轨迹，发现PTEN突变是早期事件，而EGFR、mTOR和NF1的潜在靶向性改变出现在肿瘤发展的后期。对成对肿瘤的纵向分析显示，只有5/20(25%)的患者存在持续突变簇。相反，在15/20(75%)的病例中，复发肿瘤的显性亚克隆是初始克隆的直接线性后代，这表明早期分支是主要的进化模式。

为了确定复发性肿瘤中改变的通路，使用NanoString Pancancer panel(800个基因)加30个与TMZ耐药相关的基因，对43例患者的匹配初始和复发肿瘤组织以及10例患者的初始肿瘤附近的正常组织进行了纵向mRNA和miRNA表达分析。正如预期的那样，来自正常邻近脑组织的样本的mRNA和miRNA表达模式与来自肿瘤组织的样本的mRNA和miRNA表达模式是分开聚类的。初始和复发肿瘤对的差异基因表达分析显示，复发肿瘤中ALK7 (ACVR1C)、RASAL1、COMP、LTBP1、HDAC1 1和BCL2上调，MDM2和LEFTY2下调。对差异表达mRNA的GO、KEGG和Reactome基因集富集分析显示，跨膜蛋白激酶活性(NES = +1.5)和TGF-β信号(NES = +1.3)等显著富集。同时，差异调控的mRNA和差异表达miRNA的预测靶点显示出几乎完全重叠的生物学功能，表明mRNA和miRNA以协调一致的方式起作用。IHC证实复发肿瘤中SMAD2/3 (TGF-β信号效应因子)、β-catenin (Wnt信号效应因子)、NF-κB (TNF效应因子)表达增强。此外还发现，ALK7支持细胞凋亡的作用在复发性肿瘤中被逆转。

该研究为复发性胶质瘤的早期分支进化提供了证据。在miRNA和mRNA表达水平上证实了高可塑性。

图1H 协同TGF-β信号通路模型。ALK7、LTBP1、RASAL1上调和LEFTY2下调可转化为TGFβ诱导的EMT和干性增加

CLINICAL INVESTIGATIONS

A distinct pattern of growth and RAC1 signaling in melanoma brain metastasis cells

Ioana Stejerean-Todoran , Phyllis A Gimotty , Andrea Watters…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):674-686. doi: 10.1093/neuonc/noac212.

编译：王樑（空军军医大学唐都医院）

脑转移黑色素瘤是最致命的并发症之一，超过 50% 的黑色素瘤患者出现脑转移。目前针对系统性黑色素瘤的治疗方法包括免疫疗法、靶向治疗或联合治疗，也包括脑转移后手术和放疗治疗。即使已有诸多治疗方法，脑转移患者的死亡和耐药的风险仍然很高，其原因可能包括血脑屏障、遗传和免疫异质性，以及脑部微环境。此研究目的是建立新的黑色素瘤脑转移疾病模型。

本次研究主要通过DNA测序、反相蛋白微阵列、蛋白质表达分析及体内体外功能研究，分析颅内转移病灶肿瘤细胞（melanoma brain metastasis，MBM)和颅外病灶细胞在生长模式和信号通路方面的差异。

研究发现，颅内MBM细胞的遗传异质性并不高，但是体外功能研究中，MBM细胞具有较低的增殖率以及与增殖相关的特异性蛋白表达模式。MBM细胞RAC1蛋白表达水平更高，激活RAC1-PAK1-JNK1信号通路；敲除RAC1基因或使用小分子抑制剂可降低MBM细胞的侵袭性，而体内功能实验敲除RAC1后肿瘤体积缩小，肿瘤生长迟缓。同时，与颅外病灶的细胞株相比，向颅内转移的MBM细胞在胰岛素或脑源性因子作用下，其高水平的RAC1表达可能会导致更多肿瘤增殖，粘附和转移。RAC1/PAK1/JNK1信号在黑色素瘤脑转移细胞中有活性，可能会为设计靶向治疗方案提供帮助。

EDITORIAL

Randomized phase III study of high-dose methotrexate and whole-brain radiotherapy with/without temozolomide for newly diagnosed primary CNS lymphoma: JCOG1114C

Kazuhiko Mishima , Ryo Nishikawa , Yoshitaka Narita , Junki Mizusawa…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):687-698. doi: 10.1093/neuonc/noac246.

编译：王樑（空军军医大学唐都医院）

本次研究主要为确定在使用大剂量甲氨蝶呤（HD-MTX）和全脑放疗（WBRT）治疗原发性PCNSL方案中加入替莫唑胺（TMZ）是否能提高生存率。

研究公开招募20-70岁的新诊断为PCNSL、免疫功能正常的患者。在使用HD-MTX治疗后，随机分为两组，A组WBRT (30 Gy) ± 10 Gy boost，B组WBRT ± TMZ维持治疗2年。主要终点是总生存期（OS）。

结果显示，从2014年9月29日至2018年10月15日期间，共招募134名患者，其中122名被随机分配并分析。在中期分析中，A组的2年OS为86.8%（95% CI：72.5-94.0%），B组为71.4%（56.0-82.2%），HR风险比为2.18（95% CI：0.95-4.98），预测在最终结果B组治疗优越性的概率约为1.3%。由于结果无效，该研究提前终止。本次研究还分析了115个肿瘤中MGMT启动子甲基化的状态，结果显示MGMT启动子甲基化状态既不能预测TMZ反应，也不能预测TMZ反应。

CLINICAL INVESTIGATIONS

Is there a future for maintenance temozolomide chemotherapy in PCNSL?

Jacoline E C Bromberg , Jeanette K Doorduijn

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):699-700. doi: 10.1093/neuonc/noad015.

编译：王樑（空军军医大学唐都医院）

原发性中枢神经系统淋巴瘤（PCNSL）是一种起源于中枢神经系统的侵袭性淋巴结外非霍奇金淋巴瘤，仅占颅内肿瘤的3%，发病率为0.4-0.44/100,000/年。由于罕见性，因此仅完成和发表少量随机III期临床研究，PCNSL患者的最佳治疗方案仍然有许多待解决的问题。

尽管目前基于大剂量甲氨蝶呤（HD-MTX）的标准诱导治疗已被广泛接受，但仍有多种不同的基于HD-MTX的多药联合方案。考虑到标准诱导治疗的完全缓解率为30%-60%，还有部分患者需要改善和巩固治疗，使用低剂量全脑放疗（WBRT）、大剂量化疗联合自体干细胞移植（ASCT）以及可能的非清髓性化疗对于提高长期生存机会至关重要。近年来，尽管PCNSL患者的生存率有了很大改善，但即使在巩固治疗后依然面临疾病复发，放疗后复发可能比大剂量化疗和ASCT后更严重。因此，PCNSL患者仍未确定最佳治疗方案。

IDH1/2 wildtype gliomas grade 2 and 3 with molecular glioblastoma-like profile have a distinct course of epilepsy compared to IDH1/2 wildtype glioblastomas

Mark P van Opijnen , C Mircea S Tesileanu , Linda Dirven…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):701-709. doi: 10.1093/neuonc/noac197.

编译：林毅（中国医科大学附属第一医院）

IDH1/2野生型（IDHwt）的具有pTERT突变和/或EGFR扩增和/或+7/-10染色体变异的2-3级胶质瘤患者与IDHwt的胶质母细胞瘤患者生存期相似，在WHO 2021版分类中被统称为胶质母细胞瘤IDHwt。但这两类肿瘤的癫痫发病率不同。本研究旨在比较两个胶质母细胞瘤亚型的癫痫病程。

我们分析了数据库中IDHwt的组织病理学2级和3级分子病理具有胶质母细胞瘤特征的病例（IDHwt hLGG）和IDHwt胶质母细胞瘤（IDHwt GBM）的患者。主要关注点为在病程中发生癫痫的比例，次要关注点包括发作起病的情况，发生癫痫的天数以及抗癫痫药物（AED）治疗的情况。

在254名患者中，IDHwt hLGG有78%（50/64）的患者，IDHwt GBM有68%（129/190）的患者在病程中发生癫痫。在组织病理学诊断之前就发生癫痫的IDHwt hLGG患者明显多于IDHwt GBM患者（90% vs 60%， P<0.001），且发生癫痫到诊断的时间也明显延长（3.5 vs 1.3个月，P<0.001）。在IDHwt hLGG组发生癫痫的总天数也明显较多（中位数7.0 vs 3.0，P=0.028），接受多抗癫痫药多药联合治疗的患者数也更多（32% vs 17%，P=0.028）。

结论：虽然这两类肿瘤在整个病程中发生癫痫的比例相似，IDHwt hLGG患者较IDHwt GBM者在诊断前就发生癫痫的机率明显更高，且在病理诊断前更早出现癫痫发作，这提示二者的临床病程明显不同。

PEDIATRIC NEURO-ONCOLOGY

Proton therapy for adult craniopharyngioma: Experience of a single institution in 91 consecutive patients

Arnaud Beddok , Nathaniel Scher , Claire Alapetite…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):710-719. doi: 10.1093/neuonc/noac210.

编译：林毅（中国医科大学附属第一医院）

成人颅咽管瘤是一类罕见的良性肿瘤，可发生多种并发症，目前对其治疗和随访的研究有限。我们开展了单中心的回顾性的研究，收集了2006-2018年间接受质子治疗的诊断为颅咽管瘤的18岁及以上的患者。晚期毒性定义为从诊断起至少18个月后出现的副反应。分别采用Kaplan-Meier和Cox回归分析对总生存期、局部无进展生存期和毒性进行了分析。

一共纳入了91名符合条件的患者，中位年龄为37岁（范围18-82岁），其中88名患者（97%）在手术后接受了质子治疗，64名患者（70.3%）质子治疗作为辅助治疗，27名患者（29.7%）在肿瘤复发时接受了质子治疗。有3名患者仅接受了质子治疗。治疗效果治疗后经过中位39个月的MRI随访，结果显示35.2%完全缓解，49.5%部分缓解，9.9%无明显变化。有5名患者局部肿瘤复发。对这5例患者复发情况的分析显示肿瘤复发部位位于总照射体积内。截至随访期末所有的患者均存活，5年局部无复发生存率为92.0%（95%CI：84.9-99.6%）。在质子治疗期间需要调整方案的患者局部复发率更高（P=0.084）。晚期毒性中最常出现的二级以上毒性是内分泌紊乱。在治疗前无症状的患者中，无一人出现听力下降，但4名（9.8%）患者发生视力变化，10名（11.3%）出现症状性的记忆力下降。肿瘤大的患者出现记忆力损害的机率更大（P=0.029）。

结论：颅咽管瘤患者接受质子治疗后的生存率结果很好，晚期毒性也可接受。需要进一步开展前瞻性的生存质量分析及神经认知研究以更好的确定迟发副作用。

EDITORIAL

Inhibition of integrated stress response protects against lipid-induced senescence in hypothalamic neural stem cells in adamantinomatous craniopharyngioma

Chaohu Wang , Huarong Zhang , Jun Fan , Qing Li…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):720-732. doi: 10.1093/neuonc/noac261.

编译：杨志荣（纽伦堡大学）

造釉细胞型颅咽管瘤（adamantinomatous craniopharyngioma, ACP）是一种具有恶性临床表现的良性肿瘤。邻近下丘脑的 ACP 通常会出现更严重的症状，并且下丘脑功能障碍的发生率更高。然而，下丘脑功能障碍的机制仍不清楚。研究发现，患者下丘脑神经干细胞(hypothalamic neural stem,htNSC）可迁移至ACP 受损的第三脑室底部 (3VF)附近处，同时htNSC 中出现大量脂滴(Lipid droplets, LDs）沉积。 进一步发现，LD 会诱导htNSC衰老并抑制神经元分化。然而，通过抑制 CD36 或整合应激反应 (ISR) 的信号传导，可以有效防止 htNSC 衰老。此外，通过OXT 的预处理，可抑制 ISR 信号传导和修复血脑屏障，来降低脂毒性。因此，减少 LD 聚集或抑制 ISR 信号传导可防止 htNSC 衰老，并可能作为改善 ACP 患者下丘脑功能障碍的靶向分子和潜在治疗靶点。

EDITORIAL

A promising future for hypothalamic dysfunction in craniopharyngioma

John Richard Apps , Juan Pedro Martinez-Barbera

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):733-734. doi: 10.1093/neuonc/noac284.

编译：杨志荣（纽伦堡大学）

造釉细胞型颅咽管瘤（adamantinomatous craniopharyngioma, ACP）是一种由CTNNB1突变，导致WNT/β-catenin信号通路激活的上皮性肿瘤。ACP通常包含固体成分和囊肿，后者富含脂质液体和炎症介质。尽管ACP严重危害患者健康，但人们对 ACP 下丘脑功能障碍的机制知之甚少。下丘脑缺陷通常归因于手术和放射治疗的直接损伤。Chaohu Wang 等人将ACP与下丘脑损伤小鼠模型的功能特征相结合，以研究 ACP 下丘脑缺陷的发病机制。研究者得出结论：脂滴可以从肿瘤上皮扩散到附近的下丘脑结构，并诱导下丘脑神经干细胞(hypothalamic neural stem,htNSC）的衰老且影响其分化。因此，作者发现，肿瘤细胞可通过非直接接触的方式，诱导下丘脑损伤。

BH3 mimetics targeting BCL-XL impact the senescent compartment of pilocytic astrocytoma

Florian Selt , Romain Sigaud , Gintvile Valinciute…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):735-747. doi: 10.1093/neuonc/noac199.

编译：徐锦芳（浙江大学医学院附属第二医院）

毛细胞性星形细胞瘤 (PA) 是最常见的儿童脑肿瘤，在儿童低级别胶质瘤（pLGG）中占比最高。尽管儿童低级别胶质瘤患者的10 年生存率超过90%，但无事件生存率却仅约 50%。一半以上进行姑息切除的患者在接受常规化疗的同时，往往还需要一种或多种挽救疗法进行辅助治疗。PAs 的特点是有丝分裂原蛋白激酶 (MAPK) 信号通路的异常激活。尽管多项I/II 期临床试验和回顾性案例研究证实，MAPK通路抑制剂 (MEKi) 司美替尼和曲美替尼在进展或复发的pLGG患者内具有良好的耐受性和一定的有效性，但在疗程结束后的短期内，肿瘤很快会出现进展或复发。因此，为了改善 PA 患者的长期结局，亟需新的治疗方案来进行弥补。

研究表明，MAPK 通路激活会引起PA 中癌基因诱导性衰老 (OIS)的发生。不到 5% 的原代 PA 细胞表达增殖标记物 Ki67，提示大多数细胞可能处于细胞增殖周期外。既然处于 OIS 中的细胞对目前抑制增殖的治疗方法反应性差，并且可能是导致肿瘤复发的主要因素，那么 OIS可能是治疗 PA的潜在突破口，而抗衰老药物将成为极具潜力的有待进一步研究的候选药物。

2015年，Zhu等人鉴别了衰老细胞中激活的促生存基因调控网络，以及沉默关键节点基因的表达可以清除这些衰老细胞。随后陆续有研究发现，包括 BH3 模拟物在内的不同机制的小分子化合物可以发挥清除衰老细胞的作用。BH3 模拟物是具有抗凋亡作用的 B 细胞淋巴瘤 2 (BCL-2) 家族成员的抑制剂，其中包括 BCL-2、BCL- XL、Bcl-2 样蛋白 2 (BCLW)、诱导性骨髓性白血病细胞分化蛋白 (MCL-1) 和 BCL2 相关蛋白 A1 (BFL-1)。在紧密平衡的内源性凋亡调控过程中，这些BCL-2 家族成员的主要功能是抑制线粒体膜电位击穿和细胞凋亡的发生。

该研究小组的前期实验结果表明，BH3 模拟物 navitoclax（BCL-2、BCL-XL 和 BCL-W 的抑制剂）在 PA 中具有抗衰老活性。无法验证和全面测试抗衰老药物在OIS 中的生物学效应的主要阻碍是缺乏更多更全面的PA模型。体外培养的原代细胞系只能得到不完整的生物学表型，不能为研究提供足够的研究数据，现有的少数可长期体外培养的pLGG细胞系 (BT40, JHH-NF1-PA1, Res186, Res259) 具有很强的细胞增殖能力，不能体现PA衰老的生物学过程，所以更不适合作为衰老研究的实验模型。

本研究的目的是为了评估多种BH3 模拟物在 PA 中的抗衰老作用，并以此为理论基础探讨这些药物的临床转化潜力。实验对象选取的是我们已建好的PA 细胞系 DKFZ-BT6624 和三个全新构建的适合细胞增殖和衰老探究实验的PA 细胞系（DKFZ-BT308, DKFZ-BT314和DKFZ-BT317）。实验目的是鉴定对于衰老 PA 细胞存活至关重要的 BCL-2家族成员，并评估相应的 BH3 模拟物清除衰老细胞的效果。

该研究小组在自行构建的四种 PA 模型内发现 BCL-XL 对于 PA细胞的OIS 维持至关重要；BH3 模拟物主要通过抑制 BCL-XL实现衰老细胞清除的作用。近年来多项研究强调了包括 BCL-XL 抑制剂在内的多种抗衰老药物在神经胶质瘤中的潜在治疗作用。然而，由于这些研究工作是基于另一种神经胶质瘤类型（成人高级别神经胶质瘤）以及不同形式下的衰老（治疗引起的衰老），与目前亟需研究的儿童低级别胶质瘤和OIS的研究背景完全不同，因此借鉴意义有限。该研究除了首次证明BCL-XL可作为 PA 的治疗靶标外，还推进了类似药物的临床转化。此外，该研究还证实了原发性 PA内具有相对于正常脑组织而言的丰富的 BCL-XL表达。然而值得注意的是，BCL2L1/BCL-XL 在所有临床样本中的表达水平具有广泛变异性，这表明BCL-XLi 药物敏感性的预测可能并不依赖于此。此外在最近的一项研究结果证实，不同癌细胞内的BCL2L1 表达水平并不能准确预测其对 BCL-XL 的依赖性。目前的几种已在临床试验中BCL-XLi有可能在未来用于PA领域的相关研究中。血小板减少是在 navitoclax I 期试验中观察到的剂量相关毒性反应。因此调整给药方案可有效提高患者的耐受性；此外，另两个优化的BCL-XLi（AZD0466和 pelcitoclax）表现出较低的血小板相关毒性反应的同时，还维持了抗肿瘤活性。

总之，该研究首次报道了在PA 细胞内的抗衰老治疗靶点。与目前临床用于治疗 PA 的化疗药物和 MEKi 相比，BCL-XLi 的优势在于可诱导 OIS状态的PA 细胞发生凋亡。与大多数临床前 pLGG 研究一样，本研究的主要局限是缺乏体内数据。据我们所知，迄今为止还没有真正的PA 体内模型可用于检测 OIS 背景下的抗衰老药物的疗效。根据本文提供的体外数据，靶向BCL-XL可能是一种有潜力进行临床转化的治疗策略，这也是迄今为止首次尝试针对PA 衰老区室进行靶向干预。未来的工作是把这些研究结果转化为临床试验，通过评估BCL-XLi 在 PA 患者中应用的安全性和有效性，推动下一步的临床转化。

EDITORIAL

Killing zombies: Senolytic therapy in pilocytic astrocytoma

Charles G Eberhart

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):748-749. doi: 10.1093/neuonc/noad016

编译：徐锦芳（浙江大学医学院附属第二医院）

因为大多数疗法无法针对肿瘤内的所有分子亚型或表型的亚群，所以肿瘤异质性是目前脑癌临床治疗效果受限的主要因素之一。既往研究主要聚焦在如何增加放疗、化疗和其他药物对肿瘤干细胞或其他肿瘤细胞的杀伤效果，以及肿瘤局部微环境如何调控治疗抵抗。在本项研究中，Selt 等人对毛细胞星形细胞瘤中研究较少的肿瘤细胞群（表现出衰老表型的细胞群）进行了深入探究。更为重要的是，研究首次报道了某些特定靶点的小分子药物可以有效诱导在低级别神经胶质瘤中占绝大多数比例的衰老细胞凋亡。

细胞衰老是一种不可逆的生长停滞状态，由 Hayflick 在体外培养的成纤维细胞中首次发现和报道，随后被认为与自然衰老过程和广泛的其他疾病有关。衰老细胞的特征不仅仅表现为增殖能力的缺失，而且还包括了 DNA 损伤反应激活、与细胞周期停滞相关的蛋白质表达增加、端粒或染色质改变以及调节肿瘤局部微环境的可溶性因子的分泌。为了解决与衰老相关的问题，“senolytic”药物在基于体现非肿瘤性衰老细胞群体存在特定的脆弱性的相应功能和表达研究中进行了开发。其中Bcl-2 家族抑制剂（例如 navitoclax）就代表一类主流的抗衰老药物，而且越来越多地被用于测试消除癌症中衰老细胞的效果。

毛细胞星形细胞瘤是最常见的儿童低级别胶质瘤，而异常激活的 BRAF 信号通路则是其中最常见的肿瘤驱动基因。始于10余年前的研究就开始认为 BRAF 激活可以促进癌基因诱导性衰老在这些肿瘤内发生。虽然许多毛细胞星形细胞瘤在临床表现上相对较惰性，增殖能力较弱，但这也使得目前主要杀伤分裂细胞的标准疗法很难起效。尽管毛细胞星形细胞瘤患者的死亡率为相对较低，但发病率很高，消灭神经系统中位于重要功能区域的非恶性增殖性肿瘤细胞的治疗方法十分有限，需要进一步研发。

阻碍针对儿童低级别胶质瘤治疗方法改进的主要原因在于，适合药物测试的临床前研究模型非常匮乏，而且体外培养过程中肿瘤细胞易发生衰老。Milde小组的此前研究已表明，手术切除得到的毛细胞星形细胞瘤标本可通过添加编码SV40大T抗原的诱导型构建体进行培养，沉默其表达则会导致细胞衰老。MAPK 抑制剂最初也在命名为DKFZ-BT66的细胞系中进行了研究。该研究小组随后使用 DKFZ-BT66 来鉴定衰老相关的分泌表型在毛细胞星形细胞瘤中的作用，并利用senolytic 化合物 navitoclax进行了一些初步实验。在本期 Neuro-Oncology的研究论文中，有更多的细胞系被采用，其研究结果可帮助senolytic 药物更加坚实地转向潜在的临床转化和应用。

此研究论文中，Selt等人构建了另外 3 种新的具有可诱导的 SV40 大 T 抗原的患者来源的毛细胞星形细胞瘤细胞系，与 DKFZ-BT66 组合使用。换句话说，三种具有 KIAA1549-BRAF 融合的模型，以及一种具有 BRAF p.V600E 突变的模型被采用。研究人员还在文章内全面展示了 4 个细胞系的其他特征，包括广泛的转录组和甲基化组学分析。 有趣的是，他们建立的体外肿瘤模型与原发肿瘤组织的基因组学信息具有较强的一致性。

已有研究表明，多种 BH3 模拟物中与 BCL-XL 亲和力最强的药物在消除毛细胞星形细胞瘤中衰老细胞的效果最佳。具体地，与 BCL-XL 强结合的 5 种小分子药物，在 4 种细胞系中的 3 种，抑制效应在纳摩尔级别浓度；而其他 9 种标准化疗药物和 MEK 抑制剂需要浓度高得多的情况下才能杀灭同样的细胞。当然，细胞数量和相对代谢活性的降低并不只是衰老细胞的特征，但在 3 种对药物敏感的细胞系中，与表达 SV40 大 T 抗原的增殖细胞系相比，衰老状态下的这些变化更显著。

对药物敏感的3个细胞系内 caspase-3 活性较高并且衰老细胞更易发生凋亡。而对 navitoclax 和其他针对 BCL-XL 的药物具有抵抗性的单个细胞系，其基因表达特征不同，这可能解释了其对药物反应不同的原因。体现BCL-XL 重要性的更多证据来自于在衰老条件下生长的模型中可诱导其表达上升。另外，研究还发现原发性毛细胞星形细胞瘤标本中的 BCL-XL 表达水平高于正常脑组织。

其他的研究小组也开始聚焦于在不同类型脑肿瘤内利用靶向抑制BCL-XL 的策略以针对其中的衰老亚群，探究是否有助于增加疗效以改善临床结果。比如，Rahman等人最近的研究报道，衰老的胶质母细胞瘤细胞表现出对 BCL-XL 抑制剂的选择敏感性。然而，考虑到毛细胞星形细胞瘤和其他 BRAF 驱动的低级别神经胶质瘤中衰老细胞的占比很高，因此Selt 等人的新工作对推动临床转化、改善PA临床治疗窘境具有特别重大的潜在意义。

未来的一个关键问题是如何将他们展示的体外模型延伸至体内模型，这对于其他低级别胶质瘤而言也极具挑战。利用体内模型和原发性肿瘤标本相结合进行分析，可以进一步回答其他的重要问题，包括：局部肿瘤微环境如何调节衰老表型，它们是否可以影响衰老药物的有效性，以及如何最有效地将衰老疗法与标准疗法结合起来进行临床治疗。

The clinical and molecular characteristics of progressive hypothalamic/optic pathway pilocytic astrocytoma

Xiaoyu Li , Daniel C Moreira , Asim K Bag , Ibrahim Qaddoumi , Sahaja Acharya , Jason Chiang

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):750-760. doi: 10.1093/neuonc/noac241.

编译：林毅（中国医科大学附属第一医院）

不能手术切除的下丘脑/视路毛细胞性星形细胞瘤即使采取多种治疗也往往进展。因此识别进展肿瘤的临床和分子特征可能能帮助预测预后和指导治疗。我们收集了72例无法手术切除的非NF1相关下丘脑/视路毛细胞性星形细胞瘤，分析并鉴别了与肿瘤进展相关的临床和生物学因素。在接受治疗后出现肿瘤进展、肿瘤转移或患者死亡的肿瘤划分为B组，剩余的纳入A组。采用患者未经治疗的肿瘤，分析了DNA甲基化和转录组表达情况，并用免疫组化验证了结果。

整个患者队列的中位随访期为12.3年，B组患者男性更多（男：女=2.6:1），诊断时年龄更小（3.2岁vs 6.7岁，P=0.005），KIAA1549-BRAF融合基因出现率更高（81.5% vs 38.5%）。B组患者CpG甲基化水平更低，线粒体基因的RNA以及E2F和NKX2.3下游基因的表达水平更高。转录组分析发现转录因子TBX3和蛋白激酶PIM1是E2F和PIM1的共同下游靶标。基因丰度分析发现MYC下游基因和MAPK，PI3K/AKT/mTOR，p53通路，以及与线粒体功能有关的通路的基因表达增加。

我们的结果提示p53-PIM1-MYC轴和TBX3可能与MAPK和PI3K/AKT/mTOR通路都对肿瘤进展有作用，提示这些靶标是潜在的可用于联合治疗的新靶点，这些发现还有助于更好的预测疾病预后。

Genetic predisposition and evolutionary traces of pediatric cancer risk: a prospective 5-year population-based genome sequencing study of children with CNS tumors

Ulrik Kristoffer Stoltze , Jon Foss-Skiftesvik , Thomas van Overeem Hansen…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):761-773. doi: 10.1093/neuonc/noac187.

编译：杨志荣（纽伦堡大学）

目前儿童中枢神经系统(central nervous system,CNS)肿瘤的病因未知，并且缺乏基于人群的遗传易感性研究。研究者开展人群的前瞻性研究，纳入128 名患有 CNS 肿瘤的儿童进行了种系全基因组测序，并涵盖 3543 名近亲的系统谱系分析。研究发现13 名儿童 (10%) 携带已知癌症的致病基因变异。这些儿童更易罹患髓母细胞瘤（OR 5.9，CI 1.6-21.2），并发展为异时性中枢神经系统肿瘤（P = 0.01）。在患有低级别胶质瘤（12.8%）和高级别肿瘤（12.2%）的儿童中也发现了类似的致病基因变异。已知的儿童癌症基因比成人恶性肿瘤风险相关基因和所有其他基因，在进化上受到更多演化约束。因此，大约 10% 的儿童中枢神经系统肿瘤可归因于已知癌症基因的罕见变异；与儿童癌症高风险相关的基因也显示出更多演化约束。

A nationwide evaluation of bevacizumab-based treatments in pediatric low-grade glioma in the UK: Safety, efficacy, visual morbidity, and outcomes

Katherine Green , Paraskevi Panagopoulou , Felice D'Arco…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):774-785. doi: 10.1093/neuonc/noac223.

编译：徐锦芳（浙江大学医学院附属第二医院）

背景：尽管循证依据有限，但贝伐单抗被越来越多地用于儿童低级别胶质瘤（pLGG）。为了提供包括功能性视觉结局在内的更大更全面队列的“真实世界”安全性和有效性数据，英国进行了全国性评估。

方法：来自 11 个中心接受基于贝伐单抗（BBT）治疗的pLGG儿童患者（2009年-2020年）被纳入研究。使用标准化神经放射/影像学（RANO-LGG）和视觉（logMAR 视力）标准来进行临床放射/影像学相关性、生存结果和多变量预后分析。

结果：88 名 pLGG 儿童患者接受了 BBT 与三线药物伊立替康 (85%) 或与一/二线化疗药物 (15%) 进行同步治疗的方案。该方案下临床副作用/毒性是有限且极小的。BBT 治疗期间出现部分缓解（PR，40%）、疾病稳定（SD，49%）和疾病进展（PD，11%）。 然而，65% 的患者在 BBT 停止后 8 个月（中位时间）时病情出现进展，基于放射/影像学标准的 3 年无进展生存率 (PFS) 为 29%。间脑综合征 (P = 0.03) 与不良 PFS 相关。 原视觉疾病包括单侧（25%）或双侧（11%）失明。 视力，尤其是患者更好的那侧，获得改善（29%）或稳定（49%）。14 名 (22%) 患者在 BBT 期间视力恶化，3 年视力相关PFS 为 53%；更常见于患者视力更差的那侧。1 型神经纤维瘤病相关视神经胶质瘤 (OPG) 观察到更优异的视力结局 (P = 0.023)。视力结局和放射/影像学表现之间的一致性为 36%；仅最优侧的视力反应可优化至 48%。

结论：BBT 可短期内治疗pLGG并延缓肿瘤远期进展，与放射/影像学评估相比具有更好更持续的视力改善效果（最佳>最差侧）。进一步研究可能可巩固 BBT在 OPG视力保护策略中的作用。

EPIDEMIOLOGY

Spatial transcriptomic analysis delineates epithelial and mesenchymal subpopulations and transition stages in childhood ependymoma

Rui Fu , Gregory A Norris , Nicholas Willard…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):786-798. doi: 10.1093/neuonc/noac219.

编译：翟玉龙（空军军医大学唐都医院）

最近通过单细胞RNA测序揭示的儿童脑肿瘤室管膜瘤的多种细胞成分可能是治疗耐药性的基础。作者使用空间转录组学来进一步推进对肿瘤微环境的理解，将细胞亚群与室管膜瘤后窝亚群A（PFA）的肿瘤结构匹配，而PFA是最常见和最致命的儿童室管膜瘤变体。对完整PFA切片的空间转录组学数据进行分析，以解决肿瘤和非肿瘤细胞类型的组织学差异。使用免疫组织化学、体外功能测定和临床模型的PFA批量转录组数据的结果分析验证了关键发现。PFA由包含多种细胞状态的上皮和间充质组织学区域组成，每个区域包括共存且空间上不同的未分化祖细胞样细胞；一个静止的间充质区群体，以及一个高度有丝分裂的祖细胞群体，该群体仅限于高级上皮细胞区，在侵袭性肿瘤中更为丰富。骨髓细胞相互作用是PFA中间充质转化的主要原因，发生在与缺氧诱导的间充质转变在空间上不同的区域，并使用PFA的体外模型复制了这些不同的EMT启动过程。本研究证明了空间转录组学在推进对室管膜瘤生物学的理解方面的效用，揭示了PFA的细胞成分、它们的相互作用以及对肿瘤进展影响的更清晰的展示。

LETTER TO THE EDITOR

National-level overall survival patterns for molecularly-defined diffuse glioma types in the United States

Quinn T Ostrom , Madison L Shoaf , Gino Cioffi …

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):799-807. doi: 10.1093/neuonc/noac198.

编译：翟玉龙（空军军医大学唐都医院）

2018年开始，分子定义的弥漫性胶质瘤类型（包括IDH-野生型胶质母细胞瘤、IDH-突变型星形细胞瘤、1p/19q-缺失的IDH-突变型少突胶质细胞瘤和H3 K27M-突变型弥漫中线胶质瘤）用于诊断脑肿瘤患者并被纳入美国癌症登记报告中。作者利用这些新数据来评估与胶质瘤综合诊断相关的美国国家级总生存率（OS）模式。对2018年被诊断为弥漫性胶质瘤并有分子标记物数据的患者在美国国家癌症数据库中进行了筛选。使用Kaplan-Meier方法计算OS，并根据WHO CNS分级、年龄、性别、肿瘤大小、治疗方案、切除程度和MGMT启动子甲基化进行分层。对WHO CNS分级不同的IDH野生型星形细胞瘤患者也进行了测算。经鉴定共8651人。WHO 4级IDH-野生型胶质母细胞瘤的一年OS为53.7%；WHO 2级、3级和4级IDH突变型星形细胞瘤一年OS分别为98.0%、92.4%和76.3%；WHO 2级和3级IDH突变1p/19q共缺失少突胶质细胞瘤一年OS分别为97.9%和94.4%；H3 K27M突变型弥漫中线胶质瘤一年OS为55.9%。在IDH野生型胶质母细胞瘤中， MGMT启动子甲基化和非甲基化的中位OS分别为17.1个月和12.4个月。此外， WHO 2级或3级的IDH-野生型弥漫性星形胶质细胞瘤与4级IDH-野生型肿瘤相比，OS更长（均p<0.001）。本研究通过分析数据库数据，提供了分子定义的弥漫性胶质瘤的美国国家OS估计值，并说明了将此类数据纳入癌症登记报告的重要性。

An expedited strategy for accurate and timely integrated molecular diagnosis of gliomas

Timothy A Gregory , Garret L Williford , Jacob M Maronge…

Neuro Oncol. 2023 Apr 6;25(4):808-809. doi: 10.1093/neuonc/noad007.

编译：翟玉龙（空军军医大学唐都医院）

2016年世界卫生组织《中枢神经系统肿瘤分类》更新版引入了分子诊断，用于对相对小众的一类实体瘤进行分类。这项进展深刻地改进了我们对肿瘤生物学的理解，导致分子标记与传统组织病理学特征在世界卫生组织最新第5版分类中广泛结合。在治疗过程中，准确的诊断和治疗决策越来越依赖于及时获取这些信息。例如，组织学级别较低的IDH野生型胶质瘤的治疗方案选择，依赖于可能将其修正诊断为胶质母细胞瘤（IDH野生型）的分子特征等。

更新后的WHO 2021分类需要NGS来对多种弥漫性胶质瘤进行综合分子诊断，MD Anderson癌症中心制定了一项新的标准操作程序（SOP），以指定程序和简化流程。该方案是通过神经肿瘤学和神经病理学之间的合作开发的，目的是加速分子分析。以前，分子测试没有标准化过程，通常在初步诊断后，术后随访时由神经肿瘤学家对患者提出检查。

在2021年3月前，根据术中快速冷冻或其他机构的组织切片，怀疑为新发或复发的弥漫性神经胶质瘤，神经病理学家团队通过电子邮件通知患者的临床团队。神经肿瘤团队随后根据患者经济条件，获得同意后开始推荐进行NGS和MGMT分析。在取得患者同意后，神经病理学家制备必要数量的未染色组织切片，在收到切片后，发送到分子诊断实验室进行分子测试。

从2021年3月到2022年10月，300名神经胶质瘤患者在MD Anderson接受了FastTrack程序。作者比较了52例FastTrack病例和66例非FastTrack患者的周转时间，发现MD Anderson实体瘤基因组分析（STGA）DNA突变图谱组从订购日期到报告结果日期的时间减少了8.0天，STGA RNA融合减少了20.8天，MGMT启动子甲基化状态减少了15.0天。FastTrack对1p/19q FISH检测的影响最小，因为它是由病理学家直接在单独的FISH实验室中进行。FastTrack方案的实施确保了大多数参加术后治疗计划就诊的患者将受益于非常及时的分子结果。据作者所知，这是此类数据的首次公开报告，并希望随后与其他机构的比较能够产生进一步的创新。