复旦大学附属华山医院神经内科赵桂宪博士组织发起“中枢神经系统脱髓鞘疾病诊断和鉴别诊断”系列直播课，邀请全国相关专家参与，分享诊治理念和经验，解析中枢神经系统脱髓鞘病变诊断和鉴别诊断的内容，希望能让更多同道、患者和家属对中枢神经系统脱髓鞘疾病有更多的认识，疾病得到尽早诊治！
【中枢神经系统脱髓鞘疾病诊断和鉴别诊断】系列直播课，第七期邀请广州医科大学附属第二医院神经内科龙友明教授带来《枢神经系统脱髓鞘疾病-TBA原理、方法和临床应用解读》。
TBA（tissue-based assay）在中枢神经系统自身免疫性疾病的诊断中具有较高价值，组织基质中含有大量的天然靶抗原，可以提供更多的抗体线索，能够对疑似患者进行抗体筛查。
什么是TBA？
龙教授首先通过患者病例讲述了TBA的临床作用及价值。TBA（tissue-based assay）是采用组织（冰冻切片或石蜡切片）为基质进行检测的抗体检测方法，可以根据荧光/组化模式推断已知的抗体或进行初筛确定抗体靶向抗原的位置，探索位置抗体。选用的组织来源可以为大鼠、小鼠及猴。
TBA原理
TBA法是应用含有数千万计抗原蛋白的切片，切片中的抗体与人的抗体具有同源性，人的抗体能够识别切片中的抗体，并与之相结合，把非特异性抗体洗掉后加入荧光标记的二抗，就可以看到结合的具体位置，根据经验进行推断，最常见的两种细胞抗体观察为神经细胞和胶质细胞的抗体。
TBA检测方法
结果判读
对于结果的判读，龙教授讲述了已知抗体NMO-IgG、NMDAR-IgG、GAD-65-IgG、AQP4-IgG、GFAP-IgG、PC-Tr/DNER抗体，并结合其典型荧光图作出了详细解读。龙教授讲到，对于不能直接读出具体靶抗原的荧光图，例如Hu-IgG、少突胶质细胞-IgG、MOG、MBP等，虽然需要通过CBA确定，但仍具有提示意义，能够排除细菌及病毒感染等情况，快速为患者启动治疗。此外，通过TBA还可帮助患者找出其他少见类型的抗体。
为什么要做TBA？
针对为什么要做TBA的问题，龙教授给出了以下几点解释：
①疾病规范诊治需要，自免性免疫性疾病不能仅依靠CBA，还需要通过TBA进行抗体筛查；
②快速流程需要:早发现、早诊断、早治疗，使患者在短时间内得到有效治疗；
③重叠抗体筛查，疑似病例分析、科研需求；
④检测抗体和组织的亲和力；
⑤发现异构体抗体。
结果解读注意点
直播中，龙教授对阳性和阴性结果解读的注意点分别进行了详细讲解。
阳性：
（1）可通过特异性的荧光模式直接阅读出抗体的靶抗原，并对临床诊断具有核心的指导作用。
a.星型细胞抗体：AQP4-IgG、GFAP-IgG;
b.神经元抗体：NMDAR-IgG、GAD-65-IgG、DNER-IgG。
（2）可通过特异性的荧光模式直接阅读出抗体的类型（具体靶抗原不清楚），并对临床诊断具有指导作用。
a.神经元表面抗体：荧光模式往往在海马和小脑分子层出现，需要CBA检测才能区分靶抗原，但是在没有CBA结果之前，可考虑自身免疫性脑炎抗体阳性，对临床具有指导意义。
b.强神经元胞浆抗体：荧光模式在不同脑组织神经元出现，大小神经元均明显，这种荧光模式并不限于HU、RI抗体，有更多的是靶抗原不明的抗体，如果出现的话考虑副肿瘤综合征的可能，对临床具有指导意义。
c.神经元膜和部分胞浆抗体：这种荧光模式在不同脑组织神经元出现，荧光集中在细胞膜，往往是靶抗原不明的抗体，强度明显者可考虑自身免疫疾病或副肿瘤综合征可能，对临床具有一定指导意义。
d.美杜莎头抗体：这种荧光模式出现在小脑浦肯野细胞，往往提示自身免疫性共济失调，考虑自身免疫疾病或副肿瘤综合征的可能，对临床具有一定指导意义。
（3）神经元抗体阳性但不限于上述类型，需结合具体荧光分布判断，尤其需要结合患者临床资料，因此仅有参考意义。
（4）少突胶质细胞抗体，例如MOG-IgG、MBP-IgG，这种荧光模式往往在纤维素中位置呈现强带状荧光，需要CBA检测才能区分靶抗原，但没有CBA结果之前，可考虑自身免疫性脱髓鞘疾病抗体阳性，需结合患者临床资料，因此有重要参考或指导意义。
（5）非特异结合：风湿相关的抗核抗体或微血管抗体、脉络丛抗体，往往没有特异临床指定意义，但也能提示患者有免疫异常，尤其是脑脊液抗体阳性。
阴性：
不同类型的基质（大鼠、小鼠、猴）TBA对不同不同标本类型（脑脊液和血清）、抗体类型具有不同的亲和力，灵敏度会有不同差别。
在阴性时需考虑三种情况：①所测的标本没有抗体；②基质的原因；③其他，例如操作失误等。龙教授强调，如临床高度怀疑有抗体存在，建议采取不同基质的重复检测策略。此外，提供详细的病史对于TBA选用基质非常重要！
除了TBA结果解读的注意点外，大家关心的标本、滴度、抗体重叠问题、不同第三方公司或实验室结果存在差异等问题，龙教授也进行了一一阐述。
对于出现CBA与TBA结果不一致的情况，龙教授在直播中予以了解释。CBA阳性、TBA阴性的主要原因是CBA灵敏度比较高，其次与TBA基质的选择也有关系。TBA阳性、CBA阴性的原因可能是异构体的问题，TBA是另外一种抗体，甚至是新型抗体。
TBA的优缺点
直播中，龙教授将TBA（组织法）与CBA（细胞法）、WB（免疫印迹）进行对比，讲述了TBA的优点及缺点。
总结
龙教授总结到，判读是诊断的关键，神经抗体TBA的准确判读需要大量的培训和专业知识辅以支持，人工智能是将来的发展方向。TBA结果的临床意义，需要与临床资料结合，甚至会诊、讨论才能得到有价值的结论。
在线答疑
答疑环节中，龙友明教授与赵桂宪博士共同对线上患者、家属及同道们的问题，给予了详尽解答。龙教授讲到，本次直播非常有意义，不仅可以与同道交流，还能够使患者及患者家属了解TBA检测的相关知识，并从中获益。赵博士讲到，抗体的检测和检测结果的解读对自身免疫性疾病的诊断有着重要作用，TBA是CBA的有力补充，对于CBA检测的抗体不到或对其有疑问的情况下，可以选择进行TBA检测，在一些疾病中，CBA结合TBA非常重要！
专家介绍
龙友明 教授
广州医科大学神经科学研究所/广州医科大学附属第二医院神经内科主任医师，博士研究生导师，博士后合作导师。广东省神经科学学会副理事长，广东省神经免疫学组副组长，中华医学会神经免疫学组委员，中国卒中学会神经免疫全国委员，广东省第一批医学杰出青年医学人才，2018广州市最有影响力中青年专家，2019广州市高层次人才重点医学人才，南山学者第三层次人才（优秀人才）。《中国免疫学和神经病学杂志》《中华全科医学》编委，《J Neurol》等中英文杂志审稿专家。
擅长领域：重点研究神经免疫病和脑血管病，专长于自身免疫性脑炎、视神经脊髓炎谱系疾病、多发性硬化、中枢神经系统血管炎、重症肌无力、格林-巴利综合征、副肿瘤综合征等疾病的诊治和缺血性脑血管疾病的介入治疗。
赵桂宪 博士
临床医学博士，2000年本科毕业于西安交通大学临床医学院。2008年博士毕业于福建医科大学，2008年至今在复旦大学附属华山医院神经内科工作，长期工作于临床一线。
擅长“中枢神经系统多发病变的诊断和鉴别诊断”，专长多发性硬化、视神经脊髓炎、中枢神经系统脱髓鞘病变等中枢神经系统免疫性疾病，同时进行多发性硬化（MS）的临床及科学研究，对周围神经病和神经遗传变性病也有一些自己的体会。
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