胶质瘤研究速递--联用左乙拉西坦和IFN-α增强替莫唑胺在MGMT阳性胶质瘤中的疗效 - 脑医汇 - 神外资讯

胶质瘤，尤其胶质母细胞瘤（GBM），是最具侵犯性的恶性脑肿瘤。自2005年以来，替莫唑胺同步放化疗联合替莫唑胺辅助治疗（Stupp方案）一直是GBM一线治疗的标准方案。但是，由于原发或继发耐药的存在，可能导致部分患者中替莫唑胺的疗效不佳。为了克服替莫唑胺耐药，许多新的治疗策略正在探索中。MGMT可以修复替莫唑胺诱导的DNA损伤，导致替莫唑胺耐药，因此，MGMT抑制剂与替莫唑胺联用可能降低化疗耐药，提高疗效。近期，由中山大学肿瘤防治中心陈忠平教授等开展的一项研究发表在《Cancer Chemotherapy and Pharmacology》上，该研究评估了左乙拉西坦和IFN-α联用增强替莫唑胺治疗胶质瘤的效果。在此，我们与大家分享该研究，希望能为大家带来一些启示。点击下载原文>>

专家简介

陈忠平教授

中山大学肿瘤防治中心，神经外科创科主任

主任医师、教授、博士生导师

胶质瘤单病种首席专家

中国抗癌协会神经肿瘤专业委员会创始人/主任委员

广东省/广州抗癌协会神经肿瘤专业委员会创始人/首任主任委员

广东省神经外科学会副主任委员

《Glioma》主编

研究目的

此前的研究提示，干扰素-α（IFN-α）和抗癫痫药物左乙拉西坦（LEV）可以分别提高TMZ治疗胶质瘤中的敏感度。本研究中，研究者进一步研究IFN-α和LEV联用改善TMZ疗效的效果。

研究方法

为评估了LEV和IFN-α在MGMT阳性和MGMT阴性的胶质瘤体外细胞系中能否提高TMZ的疗效，研究者进行了克隆形成分析和细胞生存能力分析。

体外研究的时间线

克隆形成分析

胶质瘤细胞系（U138，U118，T98 G，SKMG-4，U87，U373 and U251）以400细胞/孔的密度种植于6孔培养板中（一式三份）。生长24小时后，使用LEV（40μg/ml）和IFN-α (200U/ml)预处理48h，然后加入TMZ (500μM），LEV (40μg/ml）和IFN-α(200U/ml) 。细胞再另外孵育72小时。一共分为7组：对照组，LEV，IFN-α，TMZ，TMZ+IFN-α，TMZ+LEV和TMZ+LEV+IFN-α。经过5天的治疗后，使用生理盐水清洗培养板，并在之后的14天中每3天更换新的培养基。研究结束时，细胞克隆经固定及染色后，使用显微镜和Image J软件进行克隆数量计数。

细胞生存能力分析

胶质瘤细胞系（U138，U118，T98 G，SKMG-4，U87，U373 and U251）以1000细胞/孔的密度种植于96孔培养板中，每组5孔。使用LEV （40μg/ml）和/或IFN-α（200U/ml）预处理48h，然后与TMZ（500μM），LEV（40μg/ml）和IFN-α（200U/ml）共同孵育72小时。共分为8组：对照组，LEV，IFN-α，LEV+IFN-α，TMZ，TMZ+IFN-α，TMZ+LEV和TMZ+LEV+IFN-α。孵育72小时后，计算各组相比对照组的生存率（%）。

此外，研究者建立了胶质瘤皮下异种移植和原位异种移植小鼠模型。用于观察在不同治疗方案（TMZ，TMZ+IFN-α，TMZ+LEV or TMZ+LEV+IFN-α）下肿瘤生长和小鼠存活的状况。同时采用Western blotting进行了评估肿瘤样本中MGMT的表达水平，促凋亡和抗凋亡标记物的水平。

研究结果

1. IFN-α，LEV和TMZ三联方案对所有4个细胞系都有显著抑制，但在MGMT阳性的细胞系（U138，GSC-1）中显示出最强抗肿瘤活性，细胞克隆数最低。

2. TMZ+LEV+IFN-α相比TMZ+LEV或TMZ+IFN-α进一步降低体外胶质瘤细胞系的增殖，尤其是MGMT阳性的细胞。

3. 细胞生存能力分析显示，在TMZ+LEV治疗的基础上，IFN-α显著降低MGMT阳性细胞系（U138，GSC-1，U118和T98 G）细胞系的生存能力，但在MGMT阴性细胞系（SKMG-4，U87U373和U251）细胞系中不明显。MGMT阴性细胞系中，LEV和IFN-α分别提高了TMZ对胶质瘤细胞的毒性，但TMZ+LEV+IFN-α group相比TMZ+LEV或TMZ+IFN-α组没有达到更高的肿瘤抑制率。

4. 皮下异种移植（U138，GSC-1 compared to SKMG-4，U87）和原位异种移植（GSC-1）小鼠模型中，LEV和IFN-α联合使MGMT阳性胶质瘤对TMZ的敏感性增高。肿瘤生长曲线，外观及重量均显示TMZ+LEV+IFN-α在MGMT阳性的细胞系移植模型中达到最强抑制效果。

5. 引人注目的是，LEV，IFN-α和TMZ联合显著延长了GSC-1胶质瘤原位移植小鼠的生存期。

讨论

大约有50%的胶质瘤患者由于MGMT的过度表达而对TMZ治疗无反应，因此发展以MGMT为靶点的联合治疗对于胶质瘤未来的治疗非常重要。一些神经肿瘤学家指出：通过合理组合“临床已获批的传统药物”也许能增强TMZ的效果。在胶质瘤治疗领域，再利用LEV和IFN-α这样的已获批药物是一种很有吸引力的策略。癫痫是胶质瘤患者最常见的症状之一，因此抗癫痫药物在脑肿瘤的治疗中有很广泛的应用，LEV作为一线抗癫痫药物之一，不仅可以抑制癫痫提高患者生活质量，还可以抑制MGMT。研究显示IFN-α不仅具有免疫调节功能，同时也可能通过抑制NF-kB磷酸化来降低MGMT的表达。此外，通过单核细胞传递的胶质瘤靶向IFN-α还可以显著抑制原位GBM的进展。

在这项研究中，体外和体内试验都证明TMZ+LEV+IFN-α在MGMT阳性的患者中表现出最好的抗肿瘤效果。同时，研究结果还显示IFN-α和LEV联合TMZ通过抑制NF-kB磷酸化显著降低MGMT的表达，进而增加肿瘤细胞的凋亡。

总体而言，该研究提示：TMZ+LEV+IFN-α的对于MGMT表达阳性的胶质瘤患者可能是一种有效的治疗方案。临床研究应进一步探索该方案在人体中的安全性和有效性，为胶质瘤患者带来获益。

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